高氯酸钠解聚非生物降解(高氯酸钠解聚非生物降解反应)

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高氯酸钠解聚非生物降解(高氯酸钠解聚非生物降解反应)

1年前 (2022-11-28)名人名言8

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如何从患者的血液中提取DNA?

提取基因组DNA和细胞核DNA是不同的方法

提取细胞核要先把细胞破碎分离出细胞核,要在甘油或其他保护剂中进行

SDS十二烷基磺酸钠:可破坏细胞膜、核膜,并使组织蛋白与DNA分离

CATB是一种抽提液,破坏细胞膜的~具体忘了~

DNA不溶于异丙醇,异丙醇可以析出DNA,产生白色絮状沉淀,用枪头挑出就可以了

以下是一些具体方法,希望有用

基因组DNA提取方法

制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤,通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素,以保证DNA的完整性,为后续的实验打下基础。主要是CTAB方法,其他的方法还有1物理方式:玻璃珠法,超声波法,研磨法,冻融法。2化学方式:异硫氰酸胍法,碱裂解法3生物方式:酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等

试验步骤:

1、贴壁细胞用胰酶消化,离心收集。

2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次,离心收集。试验步骤2再重新作一边。

3、加入5mlDNA提取缓冲液,(10mmol/LTris-cl,0.1mol/LEDTA,o.5%SDS),混匀。

4、加入25ul蛋白酶K,使终浓度达到100ug/ml,混匀,50℃水浴3h,

5、用等体积的酚抽提一次,2500rpm离心收集水相,用等体积的(酚,氯仿,异戊醇)混合物抽提一次,2500r/min离心收集水相

6、用等体积的氯仿,异戊醇抽提一次。加入等体积的5mol/L的LiCL,混匀,冰浴,10min.。

7、2500rpm离心10min.转上清于一离心管中。加入等体积的异丙醇。室温10min。

2500rpm,离心10min。弃上清。

8、加入0.1倍体积3mol/L乙酸钠(PH5.2)与2倍体积-20℃预冷无水乙醇。-20℃20min。

9、12000r/min,室温离心5min。弃上清。将DNA溶于适量TE中。

外周血DNA提取技术

分离外周血白细胞提取方法:

试验步骤:

1、取人肘静脉血5ml,EDTA抗凝,2500rpm离心10min。

2、小心吸取上层血浆,分装到3个0.5ml离心管中。

3、在血细胞中加入3倍体积的溶血液,摇匀,冰浴15min。

4、2500rpm离心10min,弃上清。

5、加入10ml溶血液,摇匀,冰浴15min。

6、3000rpm离心10min,弃上清。

7、倒置离心管,去掉残液。

8、得白细胞,-80?C冻存。

试验要求:

血至分离白细胞之间隔时间在室温下放置不超过2h,4℃放置不超过5h,以防白细胞自溶。

氯仿法抽提外周血白细胞基因组DNA:

试验试剂:

Ligsisbuffer:

133mMNH4ClNHCl7.12g0.9mMNH4HCO3NH4HCO30.071g0.1mMEDTA0.5mMEDTA0.2ml;最后加灭菌去离子水至1000ml,高压灭菌。

ACD抗凝剂:柠檬酸1.68g柠檬酸钠4.62g葡萄糖5.15g;最后加灭菌去离子水至350ml,高压灭菌。

提取缓冲液(Extractionbuffer):

10mMTrisCl(PH=8.0)1MTris.Cl(PH=8.0)1ml0.1mMEDTA(PH=8.0)0.5mMEDTA(PH=8.0)20ml0.5%SDS10%SDS0.5ml;最后加灭菌去离子水至100ml,高压灭菌

试验步骤:

1、在500μl抗凝血中加入ligsisbuffer1000μl,充分颠混至清亮。以4000rpm,离心5min。弃上清液。

2、沉淀中加入ligsisbuffer1500μl,充分匀浆。以6000rpm,离心5min。

3、彻底弃去上清,加入extractionbuffer500μl(裂解细胞),混匀置于37℃,水溶1h。

4、加入8μl的蛋白酶K,颠混,37℃过夜(或55℃,3h,但是37℃效果要好些)。

5、每管加入450μl饱和酚(取溶液下层)缓慢摇晃10min,以5500rpm,离心15min。

6、取上清,每管加入250μl饱和酚和250μl氯仿-异戊醇,摇匀10min,以5500rpm,离心15min。

7、取上清,每管加入500μl氯仿-异戊醇,摇匀10min,以5500rpm,离心15min。

8、取上清,每管加50μl的3M的NaAC+,适量无水乙醇(预冷)至满,摇匀放入-20℃保存2h以上。

9、以12000rpm,离心20min。去上清,加入70%乙醇500μl,以12000rpm,离心5min,去上清,50-60℃干燥。

10、加入50μl灭菌去离子水,转弹,混匀。

NaI提取法提取外周血白细胞基因组:

实验步骤:

1、取外周抗凝血(全血)100ul于eppendorf管中,12000rpm离心12min。

2、弃上清,加双蒸水200ul溶解,摇匀20s。

3、混匀后加6MNaI溶液200ul,摇匀20s。

4、加入氯仿/异戊醇(24:1)400ul,边加边摇,摇匀20s,12000rpm离心12min。

5、取上层液350ul,加入另一新eppendorf管中,加0.6倍体积异丙醇,摇匀20s,室温放置15min,静置后的反应体系15000rpm离心12min,使沉淀紧贴eppendorf管壁。

6、弃异丙醇,加70%乙醇1ml(不振动),以15000rpm离心12min。

7、弃乙醇,敞开eppendorf管盖,烘干(37℃恒温箱)后,加1xTE溶液30ul,溶解DNA>12h以上,制成的DNA液-20℃冰箱保存备用。

常用的外周血白细胞基因提取方法:

试验原理:

苯酚/氯仿提取DNA是利用酚是蛋白质的变性剂,反复抽提,使蛋白质变性,SDS(十二烷基磺酸钠)将细胞膜裂解,在蛋白酶K、EDTA的存在下消化蛋白质或多肽或小肽分子,核蛋白变性降解,使DNA从核蛋白中游离出来。DNA易溶于水,不溶于有机溶剂。蛋白质分子表面带有亲水基团,也容易进行水合作用,并在表面形成一层水化层,使蛋白质分子能顺利地进入到水溶液中形成稳定的胶体溶液。当有机溶液存在时,蛋白质的这种胶体稳定性遭到破坏,变性沉淀。离心后有机溶剂在试管底层(有机相),DNA存在于上层水相中,蛋白质则沉淀于两相之间。酚-氯仿抽提的作用是除去未消化的蛋白质。氯仿的作用是有助于水相与有机相分离和除去DNA溶液中的酚。抽提后的DNA溶液用2倍体积的无水乙醇在1/103mol/LNaCl存在下沉淀DNA,回收DNA用70%乙醇洗去DNA沉淀中的盐,真空干燥,用TE缓冲液溶解DNA备用。

试验步骤:

1、将1mlEDTA抗凝贮冻血液于室温解冻后移入5ml离心管中,加入1ml磷酸缓冲盐溶液(PBS),混匀,3500rpm离心15min,倾去含裂解红细胞的上清。重复一次。用0.7mlDNA提取液混悬白细胞沉淀,37℃水浴温育1h。

2、将上述DNA提取液混悬白细胞,37℃水浴温育1h后,加入1mg/ml蛋白酶K0.2ml,至终浓度为100-200ug/ml,上下转动混匀,液体变粘稠。50℃水浴保温3h,裂解细胞,消化蛋白。保温过程中,应不时上下转动几次,混匀反应液。

3、反应液冷却至室温后,加入等体积的饱和酚溶液,温和地上下转动离心管5-10min,直至水相与酚相混匀成乳状液。5000rpm离心15min,用大口吸管小心吸取上层粘稠水相,移至另一离心管中。重复酚抽提一次。加等体积的氯仿:异戊醇(24:1),上下转动混匀,5000rpm离心15min,用大口吸管小心吸取上层粘稠水相,移至另一离心管中。重复一次。

4、加入1/5体积的3mol/LNaAc及2倍体积的预冷的无水乙醇,室温下慢慢摇动离心管,即有乳白色云絮状DNA出现。用玻璃棒小心挑取云絮状的DNA,转入另一1.5ml离心管中,加70%乙醇0.2ml,以5000rpm离心5min。洗涤DNA,弃上清,去除残留的盐。重复一次。室温挥发残留的乙醇,但不要让DNA完全干燥。加TE液20ul溶解DNA,置于摇床平台缓慢摇动,DNA完全溶解通常需12-24h。制成的DNA液-20℃冰箱保存备用。

真核细胞DNA的制备

一般真核细胞基因组DNA有107-9bp,可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取,常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞,随后用酚抽提而实现的。这一方法获得的DNA不仅经酶切后可用于Southern分析,还可用于PCR的模板、文库构建等实验。

根据材料来源不同,采取不同的材料处理方法,而后的DNA提取方法大体类似,但都应考虑以下两个原则:

1、防止和抑制DNase对DNA的降解。

2、尽量减少对溶液中DNA的机械剪切破坏。

试剂准备:

1、TE:10mMTris-HCl(pH7.8);1mMEDTA(pH8.0)。

2、TBS:25mMTris-HCl(pH7.4);200mMNaCl;5mMKCl。

3、裂解缓冲液:250mMSDS;使用前加入蛋白酶K至100mg/ml。

4、20%SDS

5、2mg/ml蛋白酶K

6、Tris饱和酚(pH8.0)、酚/氯仿(酚∶氯仿=1∶1)、氯仿

7、无水乙醇、75%乙醇

试验步骤:

材料处理:

1、新鲜或冰冻组织处理:

1)取组织块0.3-0.5cm3,剪碎,加TE0.5ml,转移到匀浆器中匀浆。

2)将匀浆液转移到1.5ml离心管中。

3)加20%SDS25ml,蛋白酶K(2mg/ml)25ml,混匀。

4)60°C水浴1-3hr。

2、培养细胞处理:

1)将培养细胞悬浮后,用TBS洗涤一次。

2)离心4000g×5min,去除上清液。

3)加10倍体积的裂解缓冲液。

4)50-55°C水浴1-2hr。

DNA提取:

1、加等体积饱和酚至上述样品处理液中,温和、充分混匀3min。

2、离心5000g×10min,取上层水相到另一1.5ml离心管中。

3、加等体积饱和酚,混匀,离心5000g×10min,取上层水相到另一管中。

4、加等体积酚/氯仿,轻轻混匀,离心5000g×10min,取上层水相到另一管中。如水相仍不澄清,可重复此步骤数次。

5、加等体积氯仿,轻轻混匀,离心5000g×10min,取上层水相到另一管中。

6、加1/10体积的3M醋酸钠(pH5.2)和2.5倍体积的无水乙醇,轻轻倒置混匀。

7、待絮状物出现后,离心5000g×5min,弃上清液。

8、沉淀用75%乙醇洗涤,离心5000g×3min,弃上清液。

9、室温下挥发乙醇,待沉淀将近透明后加50-100mlTE溶解过夜。

植物组织中DNA的提取

试验原理:

脱氧核糖核酸(deoxribonucleicacid,DNA)是一切生物细胞的重要组成成分,主要存在于细胞核中,盐溶法是提取DNA的常规技术之一。从细胞中分离得到的DNA是与蛋白质结合的DNA,其中还含有大量RNA,即核糖核蛋白。如何有效地将这两种核蛋白分开是技术的关键。DNA不溶于0.14mol/L的NaCl溶液中,而RNA则能溶于0.14mol/L的NaCl溶液之中,利用这一性质就可以将二者从破碎细胞浆液中分开。制备过程中,细胞破碎的同时就有Dnase释放到提取液中,使DNA因被降解而影响得率,在提取缓冲液中加入适量的柠檬酸盐和EDTA,既可抑制酶的活性又可使蛋白质变性而与核酸分离,再加入阴离子去垢剂0.15%的SDS,经过2h搅拌,或用氯仿-异醇除去蛋白,通过离心使蛋白质沉淀而除去,得到的是含有核酸的上清液。然后用95%的预冷乙醇即可把DNA从除去蛋白质的提取液中沉淀出来。

植物DNA的SDS提取法:

试验试剂:

1、研磨缓冲液:称取59.63gNaCl,13.25g柠檬酸三钠,37.2gEDTA-Na分别溶解后合并为一,用0.2mol/L的NaOH调至pH7.0,并定容至1000ml。

2、10×SSC溶液:称取87.66gNaCl和44.12g柠檬酸三钠,分别溶解,一起定容至1000ml。

3、1×SSC溶液:用10×SSC溶液稀释10倍。

4、0.1×SSC溶液:用1×SSC溶液稀释10倍。

5、Rnase溶液:用0.14mol/LNaCl溶液配制成25mg/ml的酶液,用1mol/LHCl,pH至5.0,使用前经80℃水浴处理5min(以破坏可能存在的Dnase)。

6、氯仿-异戊醇:按24ml氯仿和1ml异戊醇混合。

7、5mol/L高氯酸钠溶液:称取NaClO4.H2O70.23g,先加入少量蒸馏水溶解再容至100ml。

8、SDS(十二烷基硫酸钠)化学试剂的重结晶:将SDS放入无水酒精中达到饱和为止,然后在70~80℃的水浴中溶解,趁热过滤,冷却之后即将滤液放入冰箱,待结晶出现再置室温下凉干待用。

9、1mol/LHCl。

10、0.2mol/LNaOH。

11、二苯胺乙醛试剂:1.5g二苯胺溶于100ml冰醋酸中,添加1.5ml浓硫酸,装入棕色瓶,贮存暗处,使用时加0.1ml乙醛液〔浓乙醛:H2O=1:50(V/V)〕。

12、1.0mol/L高酸溶液(HClO4)。

13、0.05mol/LNaOH。

14、DNA标准液:取标准DNA25mg溶于少量0.05mol.L-1NaOH中,再用0.05mol/LNaOH定容至25ml,后用移溶管吸取此液5ml至50ml容量瓶中,加5.0ml1mol/LHClO4,混合冷却后用0.5mol/LHClO4定容至刻度,则得100μg/ml的标准溶液。

实验步骤:

1、称取植物幼嫩组织10g剪碎置研钵中,加10ml预冷研磨缓冲液并加入0.1g左右的SDS,置冰浴上研磨成糊状。

2、将匀浆无损转入25ml刻度试管中加入等体积的氯仿-异戊醇混合液,加上塞子,剧烈振荡30s,转入离心管,静置片刻以脱除组织蛋白质。以4000rpm离心5min。

3、离心形成三层,小心地吸取上层清液至刻度试管中,弃去中间层的细胞碎片、变性蛋白质及下层的氯仿。

4、将试管置72℃水浴中保温3min(不超过4min),以灭活组织的DNA酶,然后迅速取出试管置冰水浴中冷却到室温,加5mol/L高氯酸钠溶液〔提取液:高氯酸钠溶液=4:1(V/V)〕,使溶液中高氯酸钠的最终浓度为1mol/L。

5、再次加入等体积氯仿-异戊醇混合液至大试管中,振荡1min,静置后在室温下离心(4000rpm)5min,取上清液置小烧杯中。

6、用滴管吸95%的预冷乙醇,慢慢地加入烧杯中上清液的表面上,直至乙醇的体积为上清液的两倍,用玻璃棒轻轻搅动。此时核酸迅速以纤维状沉淀缠绕在玻璃棒上。

7、然后加入0.5ml左右的10×SSC,使最终浓度为1×SSC。

8、重复第6步骤和第7步骤即得到DNA的粗制品。

9、加入已处理的Rnase溶液,使其最后的作用浓度为50~70μg/ml,并在37℃水浴中保温30min,以除去RNA。

10、加入等体积的氯仿-异戊醇混合液,在三角瓶中振荡1min,再除去残留蛋白质及所加Rnase蛋白,室温下以4000rpm离心5min,收集上层水溶液。

11、再按6、7步骤处理即可得到纯化的DNA液。

植物DNA的CTAB提取法:

试验步骤:

1、称取新鲜叶片2-3g,剪碎放入研钵中,在液氮中研磨成粉末。

2、将粉末转移到加有7ml经预热的15×CTAB提取缓冲液15ml离心管中,迅速混匀后置于65℃水浴中,温育30min。

3、取出离心管,冷却至室温,加入氯仿/异戊醇(24:1),充分混匀,室温下2300转离心20min。

4、将上清转移至另一新的15ml离心管中,加入1/10体积10%的CTAB和等体积的氯仿/异戊醇。充分混匀,2300rpm离心20min。

5、转移上清至另一新的15ml离心管中,加入等体积1%的CTAB沉淀缓冲液,轻轻摇晃至形成DNA絮状沉淀。1000rpm离心10min,使DNA沉淀于管底。

6、加入1.5-2ml的1mol/LNaCl及5μlRNase置于56℃水浴中过夜。

7、待DNA完全溶解后,加2-3ml4℃预冷的95%的冰乙醇使DNA沉淀,挑出DNA,置于15ml离心管中,用70%乙醇清洗30min。

8、离心机甩5s,倒出70%乙醇,再用95%乙醇浸泡5min,倒出95%乙醇,在超净工作台上吹干。

9、将风干的DNA直接在4℃保存备用或溶于100μlTE溶液中于-20℃保存。

细菌DNA的提取方法

针对一些不易于提取的细菌的方法:

试验试剂:

抽提缓冲液:2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)100mMTris-HCl(pH8.0)

25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl

10MLiCl

2MLiCl

DEPC-water(抑制RNA酶活性)

3MNaAc(pH5.2)

96%乙醇

70%乙醇

试验步骤:

1、抽提缓冲液65℃预热。

2、加菌体到已经预热的缓冲液(700ul)中混匀,65℃,10min。

3、加酚/氯仿/异戊醇(25:24:1),振荡,以12,000rpm,离心10min。

4、取上清,加氯仿/异戊醇(24:1)振荡,以12,000rpm,离心10min。

5、重复再作一次步骤4。

6、加入1/10体积的3M醋酸钠和1.5倍体积的乙醇(或加入等体积的异丙醇),-20C下沉淀。

7、以2,000rpm,离心10min。

8、弃上清,以70%乙醇条洗沉淀,也可以再用100%乙醇洗,然后溶解于100ml水中。

较为常用的细菌DNA提取方法:

实验步骤:

1、将菌株接种于液体LB培养基,37℃震荡培养过夜。

2、取1.5ml培养物12000rpm离心2min。

3、沉淀中加入567ul的TE缓冲液,反复吹打使之重新悬浮,加入30ul10%SDS和15ul的蛋白酶K,混匀,于37℃温育1h.

4、加入100ul5mol/LNaCl,充分混匀,再加入80ulCTAB/NaCl溶液,混匀后再65℃温育10min。

5、加入等体积的酚/氯仿/异戊醇混匀,离心4-5min,将上清转入一只新管中,加入0.6-0.8倍体积的异丙醇,轻轻混合直到DNA沉淀下来,沉淀可稍加离心。

6、沉淀用1ml的70%乙醇洗涤后,离心弃乙醇.

真菌DNA提取总结的两种方法:

第一种方法:

试验步骤:

1、取真菌菌丝0.5g,在液氮中迅速研磨成粉。

2、加入4mL提取液,快速振荡混匀。

3、加入等体积的4mL的氯仿:异戊醇(24:1),涡旋3~5min(此处是粗提没有加酚)。

4、以4℃,1000rpm,离心5min。

5、上清再用等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提一次。以4℃,10,000rpm,离心5min。

6、取上清,加入2/3倍体积的-20℃预冷的异丙醇或2.5倍体积的无水乙醇沉淀,混匀,静置约30min。

7、用毛细玻棒挑出絮状沉淀,用75%乙醇反复漂洗数次,再用无水乙醇漂洗1次,吹干,重悬于500ulTE中。

8、加入1ulRNaseA(10mg/mL),37℃下处理1h。

9、用酚(pH8.0):氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次。以4℃,10,000rpm,离心5min。

10、取上清,加入1/10倍体积的3MNaAc,2.5倍体积的无水乙醇,-70℃沉淀30min以上。

11、沉淀用75%乙醇漂洗,风干,溶于200ulTE中,-20℃保存备用。

DNA提取液:0.2MTris-HCl(pH7.5),0.5MNaCl,0.01MEDTA,1%SDS,3MNaAc。

第二种方法:

试验步骤:

1、真菌菌丝0.5-1g,在液氮中迅速研磨成粉。

2、加入3mL65℃预热的DNA提取缓冲液,快速振荡混匀65℃水浴30min,期间混匀2-3次。

3、加入1mL5MKAc,冰浴20min。

4、等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃离心5min)。

5、取上清,加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇,混匀,静置约30min。

6、用毛细玻棒挑出絮状沉淀,用75%乙醇反复漂洗数次,再用无水乙醇漂洗1次,吹干,重悬于500ulTE中。

7、加入1ulRNaseA(10mg/mL),37℃处理1h。

8、用酚(pH8.0):氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次。以4℃,10,000rpm,离心5min。

9、取上清,1/10V3MNaAc,2.5V体积的无水乙醇,-70℃沉淀30min以上。

10、沉淀用75%乙醇漂洗,风干,溶于200ulTE中,-20℃保存备用。

植物基因组提取(CATB法)

作者: 时间:2008-05-13 14:26:27 来源: 生物谷 浏览评论

一、实验目的

掌握植物总DNA的抽提方法和基本原理。学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA抽提方法。

二、实验原理

通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞,由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响,在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。在液氮中研磨,材料易于破碎,并减少研磨过程中各种酶类的作用。

十二烷基肌酸钠(sarkosyl)、十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl ammomum bromide,简称为CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,简称SDS)等离子型表面活性剂,能溶解细胞膜和核膜蛋白,使核蛋白解聚,从而使DNA得以游离出来。再加入苯酚和氯仿等有机溶剂,能使蛋白质变性,并使抽提液分相,因核酸(DNA、RNA)水溶性很强,经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入无水乙醇使DNA沉淀,沉淀DNA溶于TE溶液中,即得植物总DNA溶液。

三、实验材料

水稻幼叶

四、主要配方

2% CTAB抽提缓冲溶液: CTAB 4g NaCl 16.364 g 1M Tris-HCl 20ml( PH8.0) 0.5M EDTA 8ml,先用70ml ddH2O溶解, 再定容至200ml灭菌, 冷却后0.2-1% 2-巯基乙醇 (400ul) 氯仿-异戊醇(24:1):先加96ml氯仿,再加4ml异戊醇,摇匀即可。

五、实验步骤

1. DNA的提取

(1) 2%CTAB抽提缓冲液在65℃水浴中预热。

(2)取少量叶片(约1g)置于研钵中,用液氮磨至粉状;

(3) 加入700ul的2%CTAB抽提缓冲液,轻轻搅动;

(4) 将磨碎液分倒入1.5 ml的灭菌中,磨碎液的高度约占管的三分之二;

(5)置于65℃的水浴槽或恒温箱中,每隔10 min轻轻摇动,40 min后取出;

(6)冷却2 min后,加入氯仿-异戊醇(24:1)至满管,剧烈振荡2~3 min,使两者混合均匀;

(7)放入离心机中10 000 rpm离心10 min,与此同时,将600 µl的异丙醇加入另一新的灭菌中;

(8) 10 000 rpm离心1 min后,移液器轻轻地吸取上清夜,转入含有异丙醇的内,将离心管慢慢上下摇动30 sec,使异丙醇与水层充分混合至能见到DNA絮状物;

(9)10000 rpm离心1 min后,立即倒掉液体,注意勿将白色DNA沉淀倒出,将离心管倒立于铺开的纸巾上; (10)60 sec后,直立离心管,加入720 µl的75%乙醇及80 µl 5 M的醋酸钠,轻轻转动,用手指弹管尖,使沉淀与管底的DNA块状物浮游于液体中;

(11)放置30 min,使DNA块状物的不纯物溶解;

(12)10000 rpm离心1 min后,倒掉液体,再加入800 µl 75%的乙醇,将DNA再洗 30 min;

(13)10000 rpm离心30 sec后,立即倒掉液体,将离心管倒立于铺开的纸巾上;数分钟后,直立离心管,干燥DNA(自然风干或用风筒吹干);

(14)加入50 µl 0.5 × TE(含RNase)缓冲液,使DNA溶解,置于37℃恒温箱约15 h,使RNA消解;

(15)置于-20℃保存、备用。

2. DNA质量检测

琼脂糖电泳检测,原理和方法见实验二。

六、 注意事项

(1)叶片磨得越细越好。

(2)移液器的使用。

(3)由于植物细胞中含有大量的DNA酶,因此,除在抽提液中加入EDTA抑制酶的活性外,第一步的操作应迅速,以免组织解冻,导致细胞裂解,释放出DNA酶,使DNA降解。

高氯酸在化工生产中有广泛应用。利用如图装置以高氯酸钠为原料制备高氯酸。下列推断正确的是。

应该选择B。

高氯酸,无机化合物,六大无机强酸之首,氯的最高价氧化物的水化物。是无色透明的发烟液体。高氯酸在无机含氧酸中酸性最强。可助燃,具强腐蚀性、强刺激性,可致人体灼伤。工业上用于高氯酸盐的制备,人造金刚石提纯,电影胶片制造,医药工业,电抛光工业,用于生产砂轮,除去碳粒杂质,还可用作氧化剂等。

强氧化剂。与还原性有机物、还原剂、易燃物如硫、磷等接触或混合时有引起燃烧爆炸的危险。

在室温下分解,加热则爆炸(但市售恒沸高氯酸不混入可燃物则一般不会爆炸)。

无水物与水起猛烈作用而放热。氧化性极强,具有强腐蚀性。

其他信息:室温时氧化活性很弱,但浓热的高氯酸是强氧化剂可与大多数金属包括金,银发生反应把它们氧化,生成对应的高价金属高氯酸盐和水,而不生成氢气。

希望我能帮助你解疑释惑。

高氯酸钠的理化特性

主要成分: 纯品

外观与性状: 无水高氯酸钠为白色正方或斜方结晶,无吸湿性。易溶于水和乙醇、甲醇、丙酮,不溶于醚。相对密度2.532,熔点482℃(分解)。工业高氯酸钠一般均以一水物的形式存在,分子式NaClO4·H2O,分子量140.44,外观为白色六方形晶体,有吸湿性,熔点130℃(失去结晶水)。相对密度2.02。易溶于水和乙醇。从一水盐转变为无水盐的温度为52.75℃。高氯酸钠是一种强氧化剂,与有机物、可燃物或还原性物质接触混合,受撞击震动或摩擦时,可发生爆炸。与浓硫酸接触也能发生爆炸。有毒!

在溶液中,由于钠离子和高氯酸根离子电迁移数相近,故也可以作为离子强度剂(类似氯化钾,但氯化钾在有机溶剂中溶解度很低,故有机电化学上常用高氯酸钠作为离子强度剂)

相对密度(水=1): 2.53

溶解性: 溶于水、乙醇。

主要用途: 制造炸药,用作分析试剂、氧化剂等。

禁配物: 易燃或可燃物、强酸、强还原剂、活性金属粉末、镁。

毒理学资料:急性毒性: LD50:2100 mg/kg(大鼠经口)废弃处置:废弃处置方法: 处置前应参阅国家和地方有关法规。用安全掩埋法处置。

有关氯酸钠的储存、使用有人知道吗

毒性防护 粉尘能刺激皮肤、粘膜和眼睛。如不慎氯酸钠溅入眼睛或溅到皮肤上,应立刻用大量水冲洗干净。吸入氯酸钠粉尘,因积累在体内而引起中毒,会出现恶心、大量呕吐、下泻、呼吸困难、肾损害等症状。误食时,要立即饮服食盐水或温肥皂水使其吐出,然后速送医院治疗。致死量为10g。 生产人员工作时、应穿工作服,戴防护口罩、乳胶手套、塑料或橡皮围裙,穿长统胶靴等劳保用品,以保护呼吸器官和皮肤。生产设备要密闭,车间通风应良好。下班后要洗淋浴。

包装储运 用内衬聚乙烯塑料袋的铁桶包装,桶口密封牢固,每桶净重50kg。包装上应有明显的“氧化剂”和“有毒品”标志。 属一级无机氧化剂,危规编号:21014。应贮存在阴凉、通风、干燥的库房内。注意防潮。严防粉末散落在地上,如有散落,必须立刻用湿黄砂拌和后扫干净。不得与糖类、油类、木炭等有机物、硫黄、赤磷、还原剂、硝酸盐、酸类(尤其是硫酸)和一切易燃物品共贮混运。运输过程中要防雨淋和日晒,注意防潮。装卸时要轻拿轻放,防止摩擦,严禁撞击。 失火时,先用砂土,再用雾状水和各种灭火器扑救,但不可用高压水。

物化性质 无色或白色立方晶系结晶。味咸而凉。相对密度2.490。熔点255℃。易溶于水,溶于乙醇、液氨、甘油。加热到300℃以上易分解放出氧气。在中性或弱碱性溶液中氧化力非常低,但在酸性溶液中或有诱导氧化剂和催化剂(如硫酸铵、硫酸铜、黄血盐等)存在时,则是强氧化剂。与酸类(如硫酸)作用放出二氧化氯。有极强的氧化力,与硫、磷及有机物混合或受撞击易引起燃烧和爆炸。有潮解性,在湿度很高的空气中能吸收水气而成溶液。有毒!

高氯酸钠的化学性质是什么?

过氯酸钠NaClO4

一般性质:无色,无毒,吸湿性结晶,sp.gr. 2.0无水物,m.p.482℃,易溶於水,自50℃以下之水溶液结晶时可得NaClO4.H2O.加热至60℃附近变为无水物,200℃放出结晶水,再加热至400℃时则分解而放出氧气.

危险性:加入有机可燃物后加以冲击摩擦或急速加热时易爆炸,其它与氯酸钾同.

贮存,使用上之注意:与氯酸钾同.

用途:炸药,过氯酸盐之制造原料,染料,显色用.

氯酸钠 毒性等级(是否属于剧毒)

氯酸钠分子式为 NaClO3 ,分子量 106.44。通常为白色或微黄色等轴晶体。在介稳定状态呈晶体或斜方晶体,味咸而凉,易溶于水、微溶于乙醇。在酸性溶液中有强氧化作用,300℃ 以上分解出氧气。氯酸钠不稳定。与磷、硫及有机物混合受撞击时易发生燃烧和爆炸,易吸潮结块,有毒。工业上主要用于制造二氧化氯、亚氯酸钠、高氯酸盐及其它氯酸盐。

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