核酸外切酶iii（核酸外切酶III如何切割RNA）
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一、是非题：15题，每题1分，共15分。答"是"写"+"，答"非"写"- "，写在题后的（）中。 1．维生素对人体的生长和健康是必需的，但人体不能合成维生素。 （ ）
2．能被某种振奋分子识别，并与其特异和共价结合的原子，原子团和分子，称为配基。 （ ） 3．当不同分子大小的蛋白质混合物流经凝胶柱层析时，小分子物质因体积小最先被洗脱出来。 （ ） 4．酶的最适pH与酶的等电点是两个不同的概念，但两者之间有相关性，两值通常比较接近或相同。 （ ） 5．对于一个酶而言，其过渡态的底物类似物与底物的物相比较，是更有效的竞争性抑制剂。 （ ） 6．Km值是酶的牲常数之一，与酶浓度、pH值、离子强度等条件或因素无关。 （ ） 7．磷脂酶A水解脂生成磷脂酸。 （ ）
8．NAD 不能由细胞浆通过线粒体内膜进入线柆体内，而NADH能在通过线粒体内膜后被氧化。 （ ） 9．寡霉素是线粒体ATP合成酶的抑制剂。 （ ）
10．核苷磷酸化酶催化腺苷的磷酸化，生成腺嘌呤和核糖-5-磷酸。 （ ） 12．肿瘤RNA病毒的复制过程为RNA-DNA-RNA。 （ ）
13．肾上腺素能与细胞膜上专一受体结合，这种激素 受体复合物能直接活化环化酶，使细胞cAMP浓度增加，引起级联反应。 （ ）
14．维生素E是一种抗氧化剂，对线体膜上的磷脂有抗自由的作用。 （ ） 15．吡哆醛、吡哆胺和吡哆醇的磷酸酯都可以作为转氨的辅酶。 （ ） 二、选择题：20题，每题1分，共20分。请将选择答案的号码填入（）中。 1．为稳定胶原三股螺旋结构，三联体的每三个氨基酸的位置必须是： （ ） ①丙氨酸；
②谷氨酸；
③甘氨酸
2．分离含胡二硫键的肽段可以用： （ ） ①SDS-PAGE电泳； ②对角线电泳； ③琼脂糖电泳 3．引起疯牛病（牛海绵脑病）的病原体是： （ ）
①一种DNA；
②一种RNA；
③一种蛋白质；
④一种多糖
4．胰岛素等激素的受体以及上成或表皮生长因子的受体都是一种： （ ）
①激酶；
②脱氢酶；
③转氨酶
5．在酶的可逆抑制剂中，不影响酶的二级常数（Kcat/Km）的是： （ ） ①竞争性抑制剂；
②非竞争性抑制剂；
③反竞争性抑制剂；
④都不是
6．“多酶体系”是指一个代谢过程中几个酶殗了一个反应链体系，多酶体系中的酶通常具有以下性质。 （ ） ① 只是在功能上相互有联系，在结构上互不相关，不存在相互作用； ② 不仅在功能上相互有联系，在结构上也有相互联系，形成复合体； ③ 上述两种情况都存在。
7．所谓“代谢物”指的是下面哪一条？ （ ） ① 特指代谢反应中的反应物； ② 特指代谢反应中的产物；
③ 特指代谢反应中的中间物；
④ 所有代谢反应中的反应物、中间物和产物都称为代谢物。
8．有的酶存在多种同工酶形式，这些同工酶所催化的反应： （ ）
中国科学院研究生院历年招收攻读硕士学位研究生入学统一考试试题 科目名称：生物化学与分子生物学
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① 并不完全相同； ② 完全相同，而且反应的平衡常数也相同；
③ 完全相同，但由于每种同工酶活性不同，反应平衡常数可以不相同。 9．脂肪肝是一种代谢疾病，它的产生主要是由于： （ ） ① 肝脏脂肪水解代谢障碍；
② 肝脏蛋白不能及时将肝细胞脂肪排出；
③ 肝脏细胞摄取过多游离脂肪酸； ④ 肝脏细胞膜脂肪酸载体异常 10．线粒体ATP/ADP交换载体在细胞内的作用是： （ ） ① 需能传送；
② 促进传送；
③ ATP、ADP的通道；
④ ATP水解酶
11．辅酶Q是线粒体内膜： （ ） ① NADH脱氢酶的辅酶； ② 琥珀酸脱氢酶的辅酶； ③ 二羧酸载体；
④ 呼吸链的氢载体 12．线粒体蛋白的跨膜传送是一种： （ ） ① 类似细胞膜的吞噬作用；
② 蛋白质解折叠后传送； ③ 通过对各个蛋白质专一的载体传送； ④ 膜内外同类蛋白质交换
13．Poly d（A-T）的Tm值较poly d（G C）为： （ ） ① 高；
②低；
③相同
14．反密码子为IGC，可识别密码子： （ ） ① GCA；； ②GCG；；
③ACG
15．RNA形成二级结构的碱基对，除了A-U和G-C外，还有： （ ）
① A C
②A G
③G U
16．RNA用强碱水解，产生： （ ） ① 2'和5'核苷酸混合物； ② 2'和3'核苷酸混合物；
③ 3'和5'核苷酸混合物；
17．能与受体结合，形成激素 受体复合物，进入细胞核调节基因表达的激素是： （ ）
① 甲状腺素 ② 肾上腺素；
③ 溏皮质激素； ④ 前列腺素 18．原核生物基因转终止子在终止点前均有： （ ）
① 回文结构；
② 多聚A序列； ③ TATA序列； ④ 多聚T序列
19．能专门水解DNA RNA杂交分子中RNA的酶是 （ ） ① DNA聚合酶I； ② 逆转录酶；
③ Rnase A； ④ 核酸外切酶III
20．真核生物中，存在于核仁中的RNA聚合酶是： （ ）
① RNA聚合酶I；
②RNA聚合酶II；
③RNA聚合酶III
三、填空题：9题，每空格答对1分，共15分
1． 已知三种超二级结构的基本组合形式______，______，______。 2． Western印迹法的原理是用______鉴定蛋白质的一种方法。
3． 酶容易失活，如何保存酶制品是一个很重要的问题。通常酶制品的保存方法有______和______等。 4． 红细胞膜带3蛋白是一种______。
5． 肝素是一种________，它的主要药理作用是________。
6． 细胞核内除了DNA外，还发现至少有二类小分子RNA，它们是核小分子RNA和________。 7． 核酸变性时，紫上吸收值增高，叫________效应。
8． 限制性内切酶特异识别和切割DNA分子中的回文结构，形成末端有粘性末端和________末端。
中国科学院研究生院历年招收攻读硕士学位研究生入学统一考试试题 科目名称：生物化学与分子生物学
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9． 内质网分为两种类型，一种是粗糙内质网，为________的场所；另一种为光滑型内质网，与________和________合成有关。
四、问答题：10题，每题5分，共50分。
1． 根据氨基酸通式的R基团极性性质，20种常见的氨基酸可分成哪四类？ 2． 简述蛋白质翻译后的加工过程。
3． 葡萄糖酵解过程的第一步是葡萄糖磷酸化形成6-磷酸葡萄糖，催化这一步反应有两种酶，已糖激酶和葡萄糖激酶。己糖激酶对葡萄糖的Km值远低于平时细胞内葡萄糖浓度，而葡萄糖激酶的Km值比较接近平时细胞内葡萄糖浓度。此外，己糖激酶受6-磷酸葡萄糖强烈抑制，而葡萄糖激酶不受6-磷酸葡萄糖的抑制。——上述描述，请你说明两种酶在调节上的特点是什么？
4． 请解释什么是酶的活力和酶的比活力，并说出活力的比活力两个指标在酶的纯化过程中分别可以反映什么？
5． 写出葡萄糖酵解生成丙酮酸过程中的步骤（写出九步即可）。（A卷此题不同，大概是脂肪肝的病机） 6． 写出氧化磷酸化的五个作用部位不同的抑制剂，并写出各处的抑制部位。
7． 真核生物mRNA的3'末端有一段poly（A），5'末端有一个“帽子”，“帽子”的结构特点是什么？ 8． 5-磷酸核糖-1-焦磷酸（PRPP）是一个重要的代谢中间物，试举出二个反应合例子。 9． 试列出tRNA分子上与多肽合成有关的位点。 10。真核生物转录前水平的基因调节主要有哪些方式？
中国科学院研究生院2002年硕士研究生入学考试 科目名称：生物化学与分子生物学（答案）
一、判断题
1 - 2 - 3 - 4 - 5 + 6 - 7 - 生成溶血磷脂 8 - 9 + 10 - 11 12 -有的为RNA-RNA 13 - 14 + 15 - 二、选择题
1 C 2 B 3 C 4 A 5 C 6 C 7 D 8 C 9 B 10 A 11 D 12 B 13 B 14 A 15 C 16 B 17 C 18 A 19 B 20 A 三、填空题
1、αα、ββ、βαβ 2、抗原抗体结合的专一性 3、低温 干燥 4、糖蛋白（阴离子交换蛋白） 5、多聚阴离子 抗凝血 6、snoRNA 7、增色效应 8、平末端 9、光面内质网 脂质 胆固醇 四、简答题
1、不带电荷的极性氨基酸、带正电荷的极性氨基酸、带负电荷的极性氨基酸、非极性氨基酸。
2、（1）末端端修饰 细菌的多肽N末端都是甲酰甲硫氨酸，真核生物的多肽N末端都是甲硫氨酸，通常N末端的甲酰甲硫氨酸或甲硫氨酸以及更多的N末端氨基酸残基都要被除去。真核生物的多肽的N末端残基还要进一步的乙醇化。羧基端的再修饰也时有发生。 （2）切除信号序列。
（3）非末端氨基酸的修饰 丝氨酸、苏氨酸残基的磷酸化；赖氨酸、谷氨酸残基的甲基化；谷氨酸、天冬氨酸的羧基化。
（4）糖基化工厂 糖蛋白的末冬酰氨，丝氨酸、苏氨酸和糖基结合。
（5）附加异戊二烯基团。许多真核生物蛋白质的半胱氨酸残基和异戊二烯基团以硫醚键结合。 （6）添加辅基 这些辅基和解键共价结合，如血红素，叶绿素、生物素等。
（7）前体修饰。有些蛋白生物合成时是以前体蛋白或多蛋白形式出现的要通过蛋白酶的切割，成为较小的活性分子。
（8）形成二硫键
3、同一种底物的同一种反应，有两种酶存在，但两种酶的活性调节能力不同：已糖激酶对6-碳糖不加选择，肌肉中的已糖激酶为别构酶，特别受其产物6-磷酸葡萄糖的强烈负反馈抵制；葡萄糖激酶则对D-葡萄糖有专一性，为诱导酶，活性不被6-磷酸葡萄糖抑制，在进食后血糖升高时，可以促使葡萄糖转变成糖原储存起来。
4、酶活力也叫酶活性，可以用酶活力单位表示，酶活力是由酶自身催化一定反应的的能力决定的，比活力是指单位质量的酶制剂的酶活力单位数，酶的比活力反应酶的纯度。 5、生化下P67 6、生化下P129
7、真核生物mRNA的5'端有一个帽子结构。这一结构的最大特点是7-甲基鸟嘌呤核苷和mRNA的5'端通过5'-5'三磷酸酯键相连，另外靠近这一帽子结构的第一和第二核苷酸的2„羟基甲基化；真核mRNA的3„末端有一个多聚A尾，这些结构都是转录后加上去的。 8、生化下P393 P397 9、有4个关键的位点 （1）反密码子
（2）携带氨基酸的3‟末端的氨基酸臂
（3）和核糖体上的蛋白质相互作用的二氢鸟嘧啶环和TΨC环 （4）氨酰t-RNA合成酶的结合位点 10、生化下P571
基因定位诱变是啥呀
在DNA水平上产生多肽编码顺序的特异性改变称为基因的定向诱变。利用这项技术一方面可对某些天然蛋白质进行定位改造，另一方面还可以确定多肽链中某个氨基酸残基在蛋白质结构及功能上的作用，以收集有关氨基酸残基线性序列与其空间构象及生物活性之间的对应关系，为设计制作新型的突变蛋白提供理论依据。一般而言，含有单一或少数几个突变位点的基因定向突变可选用下列五种策略，而大面积的定位突变则采取基因全合成的方法。
1 局部随机掺入法
将待突变的靶基因克隆在一个载体质粒的特定位点上，其上游紧接着两个酶切位点RE1和RE2，它们分别能产生5’和3’突出的单链粘性末端。用大肠杆菌核酸外切酶III末端特异性降解经RE1和RE2双酶切开的重组质粒3’凹端，并通过酶解反应时间控制新生成的单链区域大小（单链区域越短，突变精度越高）。终止反应后，单链区域用Klenow酶补平，底物除四种正常的dNTP外，还包括一种特殊结构的脱氧核糖核苷酸类似物，在缺口填补过程中，该类似物掺入到DNA链的一处或多处。随后再用S1核酸酶处理单链末端，并以T4-DNA连接酶连接成环。重组分子转化大肠杆菌，在体内复制过程中，由于类似物的碱基配对非特异性，50%的扩增产物分子内部引入了错配碱基，并导致位点突变。由这种方法产生的突变体一般含有几对取代碱基，而突变的区域则取决于外切酶III末端降解的程度。
2 碱基定点转换法
能导致碱基定点转换的最简单方法是使用某些化学试剂在体外诱变DNA分子。通常将质粒DNA或待突变DNA片段用诱变剂处理后，转化大肠杆菌，构建突变体文库。最常见的体外诱变剂为亚硫酸氢钠，在DNA单链的情况下，它能特异性地使胞嘧啶残基脱氨形成尿嘧啶残基。处理后的DNA单链再由DNA聚合酶体外转化为双链结构，在复制过程中，原DNA分子上的CG碱基对便转换成TA碱基对。从表面上看这种方法所引入的突变并非定点，但如果合适地控制诱变剂的处理条件，便能做到每个DNA单链分子只含单一转换的碱基，而且其位点随机分布，这样即可在样本庞大的突变体文库中挑选出在期望位点上突变的重组分子。
除了上述化学诱变外，还可以借助于酶促合成对DNA分子进行所有可能的碱基对转换。其原理是使单链DNA在不理想的反应条件下进行体外复制，如较高或较低的离子强度、不平衡的四种核苷酸底物浓度以及缺少从3’至5’核酸外切活性的DNA聚合酶（Taq）等。在体外DNA聚合反应系统中，如果某种核苷酸底物浓度过低，当模板要求该底物时便有可能为其它三种底物所取代，从而导致序列突变。
3 部分片段合成法
如果在待突变的位点上下游含有合适的限制性内切酶识别序列，尤其当多个待突变位点集中分布在该区域时，可考虑直接化学合成这一片段，在此过程中将欲突变的碱基设计进去，然后以此人工合成的寡聚核苷酸片段置换重组质粒上对应的待突变区域，即可完成基因的定点突变。部分片段合成法特别适用于系统改变功能蛋白的氨基酸序列，并在体内观察突变位点对蛋白质生物功能的影响，从而确立突变前这些氨基酸残基对蛋白质结构和功能的贡献。例如，在大肠杆菌噬菌体433和P22阻遏蛋白分子中，-螺旋-转角--螺旋结构域与操作子DNA的结合特性就是用上述方法研究的。
4 引物定点引入法
引物定点引入法实质上是一种寡聚核苷酸介导的定点诱变方法，它能在克隆基因内直接产生各种点突变和区域突变。首先将待突变的目的基因克隆在M13-RF DNA载体上，转化大肠杆菌，挑选重组噬菌斑，从中分离出重组DNA正链；人工合成与待突变区域互补的寡聚核苷酸引物，并在此过程中设计引入突变碱基，然后在较温和条件下与重组DNA正链退火，经DNA体外复制和连接后，双链分子重新转化大肠杆菌；以上述合成的寡聚核苷酸片段为探针，在严格条件下（如将杂交温度提高5-10℃）杂交筛选含有突变碱基的噬菌斑，从中分离纯化出RF DNA双链分子进行克隆表达。相似地，若要在DNA特定位点上插入或缺失一段，也可设计合成特殊结构的寡聚核苷酸引物，并将之引入待突变区域。但须注意的是欲插入或缺失的DNA片段应小于引物本身的长度，否则退火操作相当困难。
从理论上来讲，在DNA体外复制并克隆后，携带突变碱基的噬菌斑应为重组噬菌斑总数的一半，但由于技术上的原因，这种期望的噬菌斑通常只有1～5%。为了特异性富集突变体便于筛选，可将待突变的重组M13-RF DNA分子首先转化具有dut和ung两个DNA代谢酶基因缺陷的大肠杆菌受体菌株。前者由于不能合成dUTP水解酶，致使细菌细胞内dUTP含量急剧上升，在DNA体内复制时，dUTP部分取代dTTP掺入到DNA新生链中；后者为尿嘧啶糖基化酶基因缺陷，这种变异株丧失了切除DNA链中脱氧尿嘧啶核苷酸残基的能力。由该菌株产生的重组M13 DNA正链分子中大约有1%的T为U所取代，经体外复制后，再将双链DNA分子导入正常的大肠杆菌受体细胞中。此时，该菌的尿嘧啶N-糖基化酶除去DNA链上的脱氧尿嘧啶核苷酸残基，使原来的模板链降解，而突变链因不含U被完整地保留下来。
5 PCR扩增突变法
将待突变的靶基因克隆在一个载体质粒上，重组分子分在含有两种不同引物的反应管A和B中。在A管内，引物I与克隆基因的区域互补，并含有唯一一个错配碱基（即突变位点），引物II则与载体区域完全互补，使得两个引物的末端位于待突变位点的右侧；在B管内，两个引物均与克隆基因互补，但引物III含有一个错配碱基，引物IV则完全互补，两个引物的末端位于待突变位点的左侧。经若干轮PCR扩增反应后，积累的双链DNA产物均为线型平头分子。将A、B两管的扩增产物混合变性并退火，只有I-III和II-IV杂合双链呈交叉缺口的环状结构且含有突变位点，这种分子不经连接可直接转化大肠杆菌，而其它组合形式的杂合双链则为线型分子，通常难以形成克隆。
核酸外切酶 iii能够切割rna么
并每条链特定部位两核苷酸间磷酸二酯键进行切割类酶辅需求切位与作用式限制酶三种类型简称限制酶别第型（Type I）根据限制酶结构、第二型（Type II）及第三型（Type III）能催化非甲基化DNA水解限制酶称限制性核酸内切酶专DNA起作用限制性核酸内切酶识别特定核苷酸序列III型限制性内切酶同具修饰及认知切割作用Ⅰ型限制性内切酶既能催化宿主DNA甲基化；Ⅱ型限制性内切酶催化非甲基化DNA水解
核酸外切酶 iii能切多少ng基因组dna
核酸外切酶 iii能切多少ng基因组dna
一条DNA有2端，就像一条绳子有两头一样，3‘5’核酸外切酶可以从3‘端开始降解DNA，而5’3‘核酸外切酶可以从5’端降解DNA，这些酶中还可以区别出从分子链的3′末端或5′末端开始切断和对单链DNA或双链DNA具有特异作用的酶。可利用这些酶水解方式的差异来分析核酸结构。
水解磷酸二酯键的3′端生成5′-单核苷酸的酶，有蛇毒磷酸二酯酶及大肠杆菌核酸外切酶Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ等； 水解5′端生成3′-单核苷酸的酶有脾脏磷酸二酯酶、嗜酸乳杆菌（Lac-tobacillus acidophilus）核酸酶。
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