牛胰脱氧核糖核酸酶(牛胰脱氧核糖核酸酶可降解)

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牛胰脱氧核糖核酸酶(牛胰脱氧核糖核酸酶可降解)

1年前 (2023-01-14)电台29

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RNase-free的名称是什么?有什么作用

DNase I(RNase-free),中文名称为脱氧核糖核酸酶I,是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶。

该酶适用于对RNA的完整性要求非常严格的应用中,如RT-PCR检测前的RNA模板准备工作。

特点是不含RNase(RNasefree),可以用于各种RNA样品的处理。提供了用于DNaseI失活所需的EDTA。

性质

来源:从牛胰腺纯化得到。

分子量:约32kDa(单体)。

活性定义:37℃10分钟内,将能够完全降解1μg pBR322质粒DNA所需的酶量定义为1个活性单位。

活性检测条件:40mM Tris-HCl(pH8.0),10mM MgSO4,1mM CaCl2,1μg of pBR322 DNA。

纯度:不含其它DNA内切酶和外切酶,不含RNA酶。

酶储存溶液:50mM Tris-acetate(pH7.5),10mM CaCl2,50%(v/v)glycerol。

脱氧核糖核酸酶I有哪些作用?

脱氧核糖核酸酶I(DNaseI)也来源于牛胰,是内切核酸酶,可优先从嘧啶核苷酸的位置水解双链或单链DNA。在Mgsuperscript2+superscript存在下,独立作用于每条DNA链,且切割位点随机。在Mnsuperscript2+superscript存在下。

它可在两条链的大致同一位置切割dsDNA,产生平端或12个核苷酸突出的DNA片段。DNaseI用途广泛,如切口平移标记时在dsDNA上随机产生切口;在闭环DNA上引入单切口,以将分子截短(在亚硫酸氧盐介导的诱变前);建立随机缺失的嵌套缺失体,用于功能分析或测序;在DNA酶足迹法(DNA:footprinting)中分析蛋白—DNA复合物;除去RNA样品中的DNA。

核酸酶的作用仅仅是作用于使DNA复制时的RNA引物吗?

核酸酶是用于降解核酸的。

作用于RNA的内切酶主要有:

牛胰核糖核酸酶(RNase)核糖核酸酶T1(RNaseT1)

核糖核酸酶U2(RNaseU2)

多头绒孢菌核糖核酸酶1

作用于DNA的内切酶主要有:

牛胰脱氧核糖核酸酶(DNaseI)牛脾脱氧核糖核酸酶

(DNaseII)

另外存在一些限制性内切酶(来自于细菌,用于基因工程)。

同时作用于RNA和DNA的外切酶:

牛脾磷酸二酯酶(SPDase)

蛇毒磷酸二酯酶(VPDase)

作用于核算分子末端单酯键的:磷酸单酯酶(PMase)

而DNA复制时引物合成的酶是引发酶,主要是一种聚合酶。原核生物大肠杆菌是一种RNA聚合酶。真核生物DNA聚合酶α(polα)可以合成引物。合成引物还有其他很多蛋白参与至少有6种。共同构成引发体(primosome)。

DNA酶Ⅰ是什么

1、大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ(DNApolymeraseⅠ,DNApolⅠ)这是1956年由ArthurKornberg首先发现的DNA聚合酶,又称Kornber酶。此酶研究得清楚而且代表了其他DNA聚合酶的基本特点。 (1)理化性质:纯化的DNApolⅠ由一条多肽链组成,约含1000个氨基酸残基,MW为109KD。分子含有一个二硫键和一个-SH基。通过二个酶分子上的-SH基与Hg2+结合产生二聚体,仍有活性。每个酶分子中含有一个Zn2+,在DNA聚合反应起着很重要的作用。每个大肠杆菌细胞中含有约400个分子,每个分子每分钟在37℃下能催化667个核苷酸掺入正在生长的DNA链。经过枯草杆菌蛋白酶处理后,酶分子分裂成两个片段,大片段分子量为76KD,通常称为Klenow片段,小片段的分子量为34KD。此酶的模板专一性和底物专一性均较差,它可以用人工合成的RNA作为模板,也可以用核苷酸为底物。在无模板和引物时还可以从头合成同聚物或异聚物。 DNAPolⅠ在空间结构上近似球体,直径约65A。在酶的纵轴上有一个约20A的深沟(cleft),带有正电荷,这是该酶的活性中心位置,在此位置上至少有6个结合位点:[1]模板DNA结合位点;[2]DNA生长链或引物结合位点;[3]引物末端结合位点,用以专一引物或DNA生长链的3'-OH;[4]脱氧核苷三磷酸结合位点;[5]5'→3'外切酶活性位点,用以结合生长链前方的5'-端脱氧核苷酸并切除之;[6]3'→5'外切酶活性位点,用以结合和切除生长链上未配对的3'-端核苷酸。

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