嘌呤霉素价格(嘌呤霉素 真菌)

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嘌呤霉素价格(嘌呤霉素 真菌)

2年前 (2022-10-20)星座23

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嘌呤霉素作用

嘌呤霉素(puromycin;PM ) 是一种蛋白质合成抑制剂,它具有与tRNA分子末端类似的结构,能够同氨基酸结合,代替氨酰化的tRNA同核糖体的A位点结合,并掺入到生长的肽链中。虽然嘌呤霉素能够同A位点结合,但是不能参与随后的任何反应, 因而导致蛋白质合成的终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟的多肽。

急求:嘌呤霉素干粉作用原理!

作用原理:

华越洋生物嘌呤霉素干粉:通过特异性地抑制原核及真核核糖体上的氨酰转运,使未成熟链合成种植,从而阻碍蛋白质合成。

抗性机制:

抗性基因pac编码嘌呤霉素N-乙酰-转移酶。

嘌呤霉素具有哪些结构?

嘌呤霉素是一种蛋白质合成抑制剂,它具有与tRNA分子末端类似的结构,能够同氨基酸结合,代替氨酰化的tRNA同核糖体的A位点结合,并掺入到生长的肽链中。虽然嘌呤霉素能够同A位点结合,但是不能参与随后的任何反应,因而导致蛋白质合成的终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟的多肽。

嘌呤霉素有什么作用?

嘌呤霉素是由白色链球菌发酵制得的抗生素,熔点175.5~177.0℃,旋光度-11(乙醇)。在酸性溶液中分解成为6-二甲胺嘌呤,O-甲基-L-酷氨酸及3-氨基-3-去氧核糖。结构与氨基酰tRNA分子中腺苷相连结的氨基酸末端基因相似,因而它可作氨基酰tRNA的类似物,从而取代一些氨基酰tRNA进入核糖体的A位与正在延伸的多肽链结合,当延长中的肽转入此异常A位时,容易脱落,以肽基嘌呤霉素的形式从核糖核蛋白体上早期解离,终止肽链合成,从而抑制了蛋白质的合成。由于嘌呤霉素对原核和真核生物的翻译过程均有干扰作用,故难于用作抗菌药物,主要用作研究蛋白质合成的生物化学工具。有人试用于肿瘤治疗。

嘌呤筛选细胞的时候可以加双抗吗

可以不加,有时候加了会有拮抗作用。

1)24孔板内以5~8 x 104 cells/孔的密度铺板,铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。细胞孵育过夜;

(2)准备筛选培养基-含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基(如0-15μg/mL,至少5个梯度); (3)细胞孵育过夜后加入筛选培养基,孵育细胞; (4)约2-3天更换新鲜的筛选培养基;

(5)每日监测细胞观察存活细胞比例。嘌呤霉素的最佳作用时间一般在1-4天之间。

(6)最小的抗生素使用浓度就是指从抗生素筛选开始1-4天内杀死所用细胞的最低筛选浓度。

嘌呤霉素筛选稳定转染细胞

(1)day 0:24孔板内以5~8 x 104 cells/孔的密度铺板,孵育过夜;

(2)制备筛选培养基:含有最佳筛选浓度嘌呤霉素(由杀灭曲线确定)的新鲜培养基;

(3)day 1:筛选第一天,去除旧的培养基,加入一定量MOI的病毒颗粒;(加入无血清培养基的总量必须充分覆盖住细胞。)

(4)病毒转导后约6-8h,再添加1ml完全培养基(血清和双抗,如果已经使用双抗。)到细胞内,然后孵育过夜;

(5)病毒转导后48h,使用嘌呤霉素筛选培养基替换旧的完全培养基。孵育。 (6)约每2-3天替换新鲜配制的筛选培养基;

(7)每天检测细胞并观察活细胞生长比例,以及turboGFP表达的水平及所占比例。在某一个时间点几乎所用存活细胞都可以表达TurboGFP。嘌呤霉素最佳的作用时间在3-10天之间。

注:病毒的MOI越高,每个细胞含有的shRNA拷贝和嘌呤霉素耐性基因越多。在做嘌呤霉素筛选时,需记住越高MOI,含越多pac拷贝的细胞能耐受更高的嘌呤霉素浓度。调整嘌呤霉素的浓度去筛选预定量的转导细胞,但是嘌呤霉素的量不能低于杀死曲线建立的最低浓度

puromycin筛选细胞浓度多少?

首先呢,先一句话概括一下Puromycin是嘌呤霉素的二盐酸盐。 Puromycin是一种抑制 protein synthesis 的氨基糖苷类抗生素

其次,Puromycin的筛选细胞浓度:2-3  μg/ml

说一下:Puromycin的溶解度

体外:

  DMSO:≥77.5 mg / mL(142.35 mM)

  H 2 O:50 mg / mL(91.84 mM ;需要超声和加热)

  * “≥”表示可溶,但饱和度未知

部分内容请看下面图片

* 请根据产品在不同溶剂中的溶解度,选择合适的溶剂配制储备液,并请注意储备液的保存方式和期限。

以上就是我的回答!!!

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